蛋白印跡轉(zhuǎn)移膜的選擇
蛋白印跡轉(zhuǎn)移（Western Blot）實驗中常用的轉(zhuǎn)移膜主要是硝酸纖維素膜（Nitrocellulose Blotting Membranes,NC）和PVDF膜，此外也有用尼龍膜、DEAE纖維素膜。
1、硝酸纖維素膜與PVDF膜特點介紹：
1）硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白印跡實驗中使用最廣泛的轉(zhuǎn)移介質(zhì)，對蛋白有很強的結(jié)合能力，且適用于各種顯色方法。NC膜使用簡便，無需甲醛預(yù)處理，只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡，電泳緩沖液中平衡幾分鐘即可。NC膜容易封閉，無需特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件，轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間。
NC膜越純，其蛋白結(jié)合能力就越高。但純的NC膜比較脆，容易卷，不適合用于需要多次重復(fù)清洗的實驗。另外由于NC膜上結(jié)合的蛋白會因一些去污劑而被代替，在封閉時最好使用較溫和的Tween20，濃度不超過0.3%。
2）PVDF膜
與硝酸纖維素膜相比，PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力、機械強度和化學(xué)相容性上都擁有更優(yōu)越的性能。做N端蛋白測序時，在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下，當(dāng)尼龍或硝纖膜已經(jīng)降解的情況下，PVDF膜依然保持本色。PVDF膜不適合熒光，同時PVDF膜需要100%甲醇預(yù)處理再用緩沖液平衡才能使用。
2、膜選擇依據(jù)：
1）膜與目的蛋白分子的結(jié)合能力（單位面積的膜能結(jié)合蛋白的載量）以及膜的孔徑（攔截蛋白的大?。?；
2）保證不影響后續(xù)的顯色檢測（即適用于所選的顯色方法，信噪比要好）；
3）如果后繼實驗有其他要求，根據(jù)不同目的來挑選不同的轉(zhuǎn)移膜。
3、兩種膜的參數(shù)對比：
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參數(shù)項
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硝酸纖維素膜（NC）膜
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PVDF膜
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材料質(zhì)地
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干的NC膜易脆
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機械強度高
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結(jié)合能力
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80-110 ug/cm2
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125-200 ug/cm2
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背景
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低
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低
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溶劑耐受性
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無
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有
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操作程序
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緩沖液潤濕，避免氣泡
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使用前100%甲醇潤濕
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檢測方式
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常規(guī)染色，可用放射性和非放射性檢測
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常規(guī)染色，可用考馬斯亮藍(lán)染色，可用于ECL檢測、質(zhì)譜分析和快速免疫檢測
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適用范圍
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大于20 KD的大分子蛋白選用0.45 um孔徑膜；小于20 KD選用0.2 um孔徑膜；小于7 KD選用0.1 um孔徑膜
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分為0.45 um和0.2 um孔徑，孔徑小的對小分子蛋白有較好的攔截吸附。主要用于核酸、糖蛋白及蛋白質(zhì)測序
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價格
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價格較便宜
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較貴
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