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毛地黃皂苷是從紫花毛地黃的葉和種子中得到的一種配糖體。水解后，它能和具有游離3β-OH 的甾體類(lèi)（例如膽甾醇）以等分子的比例形成難溶于水的分子化合物的毛地黃皂苷化合物，因此被廣泛利用來(lái)進(jìn)行甾醇的定性和分離。同時(shí)，在生化研究領(lǐng)域，毛地黃皂苷也可作為免疫沉淀最常用的去污劑、溶解線粒體外膜試劑等。
百靈威推薦J&K毛地黃皂苷：
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◆產(chǎn)品介紹
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產(chǎn)品編號(hào)
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中文名稱(chēng)
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英文名稱(chēng)
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CAS
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包裝
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毛地黃皂苷
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Digitin
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500 mg
5 g
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分子式：C56H92O29
分子量：1229.32
純 度：>50% (HPLC)
熔 點(diǎn)：235-240℃
比旋光度［α］20D：-54°(0.45g于15.8 mL甲醇中)
性 狀：白色結(jié)晶粉末，有吸濕性
溶解性：1g溶于57mL無(wú)水乙醇、溶于220 mL 95％乙醇，幾乎不溶于水、乙醚和氯仿
儲(chǔ)存條件：充氬密封干燥保存
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◆ 技術(shù)說(shuō)明
1.甾醇沉淀反應(yīng)
①羊毛醇中膽甾醇含量測(cè)定：精確稱(chēng)量約1 g 干燥羊毛醇，加溫乙醇25 mL 溶解，過(guò)濾，殘留物用50 mL 溫乙醇洗滌，冷后，濾液中加乙醇至100 mL，取此液 10mL，加毛地黃皂苷/ 乙醇溶液（1/200）40 mL，將此液加溫至60℃后，室溫放置18 h，用已知質(zhì)量的坩堝形玻璃過(guò)濾器將析出物濾出，殘留物依次用乙醇15 mL、丙酮15 mL、熱四氯化碳15 mL洗，并在105℃干燥至恒重，按下式計(jì)算膽固醇量：膽甾醇的量（mg）= 析出物的量（g）×241。
②維生素D 測(cè)定步驟中，將樣品通過(guò)毛地黃皂苷柱子，利用甾醇與毛地黃皂苷生成沉淀而除去甾醇，洗脫液為乙醚/ 己烷 = 1/5 配制而成，甾醇/毛地黃皂苷 = 1/14 用量。
③支原體毛地黃皂苷敏感性試驗(yàn)方法：用95% 酒精配制1.5% 毛地黃皂苷液，56℃水浴加熱使溶解，將此液浸濕滅菌的小圓濾紙，37℃使干燥，置冰箱保存使用。將待檢支原體菌液涂種于固體培養(yǎng)基上，將上述毛地黃皂苷紙片放于接種培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3-5d 后，低倍鏡下觀察菌落生長(zhǎng)情況，若有抑制帶出現(xiàn)，帶寬 >2 mm 的為支原體，帶寬 <2 mm 為無(wú)甾醇原體。
2.溶膜除垢
有些巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等在常用的電泳緩沖液中難以溶膜，毛地黃皂苷可與細(xì)胞膜上的膽固醇作用，使細(xì)胞膜穿孔、溶解，穿孔后蛋白質(zhì)等大分子的活性部分伸到細(xì)胞外, 與熒光標(biāo)記的相應(yīng)抗體結(jié)合, 通過(guò)毛細(xì)管電泳, 單個(gè)細(xì)胞表面的熒光強(qiáng)度可被激光檢測(cè), 從而可反映單個(gè)細(xì)胞內(nèi)某蛋白分子的含量。
細(xì)胞凋亡的檢測(cè)中，凋亡檢測(cè)采用APO 2.7 標(biāo)記法，取1×106 個(gè)細(xì)胞，加入毛地黃皂苷100 μL，冰浴20 min，用冷PBS 洗一遍，加20 μL APO 2.7PE，震蕩、混勻，室溫避光15 min，用PBS洗一遍，棄上清，重懸，避光至上機(jī)檢測(cè)（Ref.(1) ）。
取處理后的2 種腫瘤細(xì)胞每毫升106個(gè)，PBS 洗2 次，移入已硅化的玻璃管。于室溫下加100 g/mL-1 毛地黃苷(digitonin)100 μL后加藻紅素(R-phycoerythrin) 標(biāo)記的APO 2.7 單抗(APO2.7PE-CY5)，于流式細(xì)胞儀(EPISC XL,Coulter) 上進(jìn)行熒光檢測(cè)，并給出相應(yīng)的凋亡細(xì)胞百分率（Ref.(2)）。
Ref.:
Ref.(1) 賈京錦等. 疑難病雜質(zhì).2006.5（4）.
Ref.(2) 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué) 2004,37(9):1379-1384.